Dosages acide-base
Principe : réaction entre un acide et une base, suivie par un indicateur coloré ou un pH-mètre. Le point d'équivalence est repéré par un changement de couleur ou un saut de pH.
Matériel : burette graduée, erlenmeyer, bécher, agitateur magnétique, pH-mètre (si suivi pH-métrique), indicateur coloré (ex : BBT, phénolphtaléine). Solutions titrante et titrée.
- Étapes : rincer la burette avec la solution titrante, prélever un volume précis de solution titrée, ajouter l'indicateur, verser la solution titrante jusqu'au virage.
- Pièges : ne pas oublier de rincer la burette (dilution), mal repérer le virage (faire un essai préliminaire), ne pas agiter suffisamment.
Dosages conductimétriques
Principe : mesure de la conductivité d'une solution en fonction du volume de réactif ajouté. L'équivalence est déterminée par l'intersection de deux droites sur le graphe σ = f(V).
Matériel : conductimètre, cellule conductimétrique, burette, bécher, agitateur magnétique. Solutions ioniques.
- Étapes : étalonner le conductimètre, placer la cellule dans la solution, ajouter la solution titrante par incréments, relever la conductivité après chaque ajout.
- Pièges : ne pas immerger complètement la cellule, agitation insuffisante, oublier de rincer la cellule entre deux mesures, diluer excessivement.
Dosages spectrophotométriques
Principe : mesure de l'absorbance à une longueur d'onde donnée, liée à la concentration par la loi de Beer-Lambert. Utilisé pour doser des espèces colorées.
Matériel : spectrophotomètre, cuves, pipettes, fioles jaugées, solutions étalons.
- Étapes : réaliser une gamme étalon, mesurer l'absorbance de chaque solution, tracer la courbe d'étalonnage A = f(C), mesurer l'absorbance de l'inconnue et lire la concentration.
- Pièges : cuves sales ou rayées, bulles dans la cuve, longueur d'onde mal réglée, gamme étalon non linéaire (vérifier le coefficient de corrélation).
PCR (Réaction de Polymérisation en Chaîne)
Principe : amplification d'un fragment d'ADN cible par cycles de dénaturation, hybridation et élongation. Utilise une ADN polymérase thermostable (Taq).
Matériel : thermocycleur, microtubes, pipettes, pointes filtrantes, mix PCR (Taq, dNTPs, amorces, tampon, MgCl2), ADN matrice, eau stérile.
- Étapes : préparer le mix dans un tube, ajouter l'ADN matrice, placer dans le thermocycleur, programmer les cycles (dénaturation 95°C, hybridation 50-65°C, élongation 72°C).
- Pièges : contamination (travailler sous hotte, changer de pointes entre chaque ajout), mauvais calcul des volumes, amorces non spécifiques, oublier le contrôle négatif.
Électrophorèse sur gel d'agarose
Principe : séparation de fragments d'ADN selon leur taille sous l'effet d'un champ électrique. Les fragments migrent du pôle négatif vers le pôle positif.
Matériel : cuve à électrophorèse, générateur, gel d'agarose, tampon de migration (TAE ou TBE), marqueur de taille, colorant (BET ou SYBR Safe), lampe UV.
- Étapes : couler le gel, déposer les échantillons dans les puits, brancher le générateur (tension constante), migrer jusqu'à séparation, révéler sous UV.
- Pièges : gel mal coulé (bulles), dépôt trop lent (diffusion), inversion des polarités, tension trop élevée (fusion du gel), oublier le marqueur de taille.
Ensemencement et antibiogramme
Principe : l'ensemencement permet de cultiver des micro-organismes sur un milieu gélosé. L'antibiogramme teste la sensibilité d'une bactérie à différents antibiotiques par diffusion en milieu gélosé.
Matériel : boîtes de Pétri, gélose (ex : Mueller-Hinton), écouvillon, pipettes, anse de platine, disques d'antibiotiques, étuve.
- Étapes : ensemencer la gélose par écouvillonnage (stries serrées), déposer les disques d'antibiotiques, incuber 24h à 37°C, mesurer les diamètres d'inhibition.
- Pièges : ensemencement non homogène, disques trop espacés ou trop proches du bord, incubation inversée (couvercle en bas), lecture des zones d'inhibition avant 24h.
